Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的处理过程中逐渐扩展

从第一次浮现呼吸道神经性球蛋白到浮现1HG哮喘病理症状的成效所部在成年人后期就有极好的详细描述，多个呼吸道神经性球蛋白阴性的成年人中会有70%在血清变换后10年内入院哮喘，而随访15年的成年人这一%-提高到84%。相比，占多数病理1HG哮喘一半以上的HG1HG哮喘的肺癌机制还没有想得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用作分阶段系统来表述1HG哮喘的成效：母体在浮现多种呼吸道神经性球蛋白时进入第1阶段，浮现摄入量异常时进入第2阶段，浮现症状时进入第3阶段。一些多发呼吸道神经性球蛋白阴性的母体，在1期和2期，成效较慢，并发展为肺癌的1HG哮喘。我们之前详细描述了一小组在首次检测到多种呼吸道神经性球蛋白样本后将近10年无哮喘的极慢成效者，这小组患儿人数不算，但特质非常明确。随后，我们断定呼吸道自身淋巴细胞特异性CD8+T蛋白重排在成效减慢的患儿中会基本上不普遍存在，但在近期肺癌和依然普遍存在的哮喘患儿中会很非常容易检测到。这不太可能确实，与成效患儿相比，这些患儿神经性重排的闭环增强。

早期研究成果确实，尽管闭环性T蛋白(Treg)量短时间，但哮喘患儿普遍存在一些功能缺陷，其中会之外对IL-2的重排能力降低。此外，哮喘患儿中会的效应CD4+T蛋白不太可能对闭环更具抵抗性，表现为效应T蛋白的诱导消退，自然产生的Treg和胃产生的诱导Treg，以及淋巴细胞随之而来的CD4+T蛋白中会IL-2重排消退。本研究成果的目的是详细描述了CD4+闭环性T蛋白(Treg)在大群极减慢成效者中会的特质，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群相结合的纵向研究成果，在21岁以下肺炎的患儿家庭成员中会检查1HG哮喘的危险因素。我们之前详细描述了依然减慢成效者的特质，他们保持稳定多重呼吸道神经性球蛋白阴性超过10年，但没有浮现哮喘的病理症状，慢性或非同步进行性神经性。随后，10名一直保持稳定无哮喘并愿意提供大量血液样本的减慢成效者设为T和B蛋白功能统计分析。在目前的研究成果中会，8名慢成效者(SP小组)，中会位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道神经性球蛋白阴性。所有的参与者都处于1HG哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道神经性球蛋白对某些淋巴细胞的阴性重排，然而，一名患儿之前处于2期将近6年，但没有浮现病理症状，一名患儿被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中会对该NAD同步进行了直接统计分析报告。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采行多参数流式蛋白术和T蛋白诱导试验统计分析报告NAD中会Treg的频所部、表HG和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和紧接)同步进行无督导聚类统计分析，统计分析报告Treg表HG。

结果：与肥胖NAD相比，来自慢成效体的梦境CD4+T蛋白的督导聚类辨识，激活的梦境CD4+ Treg频所部提高，与阿托品诱导的TNFR相关蛋白(GITR)暗示提高有关。一名HbA1c升高的患儿与成效减慢者和给定的结果表明相比，Treg谱有所完全相同。功能统计分析确实，与肥胖NAD相比，来自减慢成效体的Treg介导的CD4+效应T蛋白诱导明显损害。表现为对效应CD4+T蛋白CD25和CD134暗示的诱导提高。

平面图1 深入的表HG统计分析辨识，CD4+Treg亚HG在慢成效队列中会提高。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标有物暗示断定出10个元簇:梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用作9个完全相同Treg标有转化的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在节点小组外面上色。每个节点中会的年糕平面图指出单个标有的暗示等级。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识整体标有暗示。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化平面图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster箱点阵平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白(l)。浅蓝色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标有秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用作CITRUS的外推证明，Treg频所部的提高是成效减慢的标志。分级依赖HG(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行分离，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及NADSP 606(浅蓝色)中会CD25+ cd127的频所部概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖HG子集的箱点阵平面图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示风力填充，箭头突出的簇被识别系统为SP和HD队列之间的完全相同。(j)箱点阵平面图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(%-)。(k)直方平面图辨识每个簇的表HG(粉红色)和Treg标有一般来说暗示与时代背景暗示(金色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。时代背景与所有其他簇中会标有的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标有秩检验

平面图3 与肥胖献血者相比，成效减慢者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T蛋白元簇(梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示标有的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热平面图(sp606不之外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR暗示结合，辨识直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon配对标有秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有NAD之外，p< 0.05(金色)NADSP 606和给定的HD不之外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级依赖HG，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅蓝色)结合，辨识直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标有秩检验

平面图4 来自减慢成效的CD4+ treg蛋白掌控效应CD4+T蛋白的能力降低。SP小组用金色的线和边框指出，HD小组用粉红色的线和边框指出，浅蓝色的线/边框指出NADsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标有为CFSE, Treg按掩蔽的%-起始。用抗CD3 /28微珠激活蛋白，培养3同一天同步进行流式蛋白术检测。(a-d)与CD4+；也者一般来说应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。用作阴性对照(激活的响应蛋白不含treg)计算诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 效应CD4+T蛋白对减慢成效的T蛋白激活的诱导更敏感性。SP小组用金色的线和边框指出，HD小组用粉红色的线和边框指出，浅蓝色的线/边框指出NADsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标有，treg按掩蔽的%-起始。用抗CD3 /28微珠激活蛋白，培养3同一天同步进行流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者联合培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱导百分所部(b)。(c,d) CD25诱导百分所部(c)和CD134诱导百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出的假设是，来自减慢成效子的激活梦境CD4+Treg在GITR暗示中会想得到了扩展和丰富多彩，强调了进一步研究成果Treg在1HG哮喘风险母体中会的异质性的更进一步。

文中出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28