Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中渐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身抗基底到再次出现1型号心血管疾病流行病学征状的困难重重率在孩童时期就有很好的刻画，多个胰脏自身抗基底感染性的孩童之中有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的孩童这一%-增高到84%。相较为之下，占多数流行病学1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的复发机制还没有得到适当的研究工作。

越来越多的人开始用于应于的系统来定义1型号心血管疾病的困难重重：个基底在再次出现多种胰脏自身抗基底时转入第1前期，再次出现低血糖异常时转入第2前期，再次出现征状时转入第3前期。一些多发胰脏自身抗基底感染性的个基底，在1期和2期，困难重重更慢，并发展为复发的1型号心血管疾病。我们之后刻画了举例来说在首次检测到多种胰脏自身抗基底抽取后至不算10年无心血管疾病的以致于慢困难重重者，这组成员病征人数不算，但特点更为具体。随后，我们发现胰脏自身淋巴细胞特异性CD8+T蛋白催化在困难重重平稳的病征之中基本不存在，但在最近复发和由来已久的心血管疾病病征之中很容易检测到。这可能表明，与困难重重病征相较为，这些病征免疫性催化的调节增强。

中期研究工作表明，尽管调节性T蛋白(Treg)数量长时间，但心血管疾病病征存在一些功能缺失，其之中包括对IL-2的催化控制能力减不算。此外，心血管疾病病征之中的物理现象CD4+T蛋白可能对调节更具抵抗性，表现为物理现象T蛋白的可抑制减弱，自然造成的Treg和基底外造成的诱发Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T蛋白之中IL-2催化减弱。本研究工作的目的是刻画了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群以致于平稳困难重重者之中的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以许多人为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病征亲属之中检测1型号心血管疾病的危险因素。我们之后刻画了长期平稳困难重重者的特点，他们维持多重胰脏自身抗基底感染性超过10年，但没有再次出现心血管疾病的流行病学征状，慢性或非完成性免疫性。随后，10名暂时维持无心血管疾病并愿意发放大量肝脏抽取的平稳困难重重者纳入T和B蛋白功能分析。在以外的研究工作之中，8名慢困难重重者(SP组成员)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗基底感染性。所有的与会者都西北面1型号心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗基底对某些淋巴细胞的感染性催化，然而，一名病征已经西北面2期至不算6年，但没有再次出现流行病学征状，一名病征被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在统计学之中对该供基底完成了单独指标。分开外周血单个氢蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白术和T蛋白可抑制实验指标供基底之中Treg的基频、性状和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究工作、表征和回归)完成无指导聚类分析，指标Treg性状。

结果：与保健供基底相较为，来自慢困难重重基底的无意识CD4+T蛋白的指导聚类推测，激活的无意识CD4+ Treg基频增高，与低剂量诱发的TNFR无关蛋白(GITR)强调增高有关。一名HbA1c消退的病征与困难重重平稳者和给定的相较为组成员相较为，Treg谱有所不同。功能分析表明，与保健供基底相较为，来自平稳困难重重基底的Treg细胞内的CD4+物理现象T蛋白可抑制值得注意毁坏。表现为对物理现象CD4+T蛋白CD25和CD134强调的可抑制增高。

所示1 深入的性状分析推测，CD4+Treg亚型号在慢困难重重配置文件之中增高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有供基底的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标有物强调深入研究工作出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标有分解成的10个元簇的MST。每个链表推选一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在链表组成员附近上色。每个链表之中的甜品所示对此单个标有的强调级别。(b)每个元聚类的热所示，以推测整基底标有强调。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解成所示，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于丰度为每个metacluster箱新相所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。橘色边框推选捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的实测推测，Treg基频的增高是困难重重平稳的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘分析(g-k)较为SP与会者和给定的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的推选性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR强调完成分开，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及供基底SP 606(橘色)之中CD25+ cd127的基频汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的箱新相所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度图例，箭头突出的簇被辨认为SP和HD配置文件之间的不同。(j)箱新相所示推测了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于丰度(%-)。(k)直方所示推测每个簇的性状(暗红色)和Treg标有相对于强调与背景强调(白色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇之中标有的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与保健献血者相较为，困难重重平稳者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调标有的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的强调热所示(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR强调串联，推测直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有供基底包括，p< 0.05(白色)供基底SP 606和给定的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR强调，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)串联，推测直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自平稳困难重重的CD4+ treg蛋白控制物理现象CD4+T蛋白的控制能力减不算。SP组成员用白色的新线和边框对此，HD组成员用银色的新线和边框对此，橘色的新线/边框对此供基底sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标有为CFSE, Treg按观察的%-反应物。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培育3天后完成流式蛋白术检测。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg培育(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育。(a,b,f) CFSE可抑制(a,e)和CFSE可抑制一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制一般而言。用于感染性相较为(激活的响应蛋白不含treg)计算可抑制一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

所示5 物理现象CD4+T蛋白对平稳困难重重的T蛋白转化的可抑制更引人注意。SP组成员用白色的新线和边框对此，HD组成员用银色的新线和边框对此，橘色的新线/边框对此供基底sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标有，treg按观察的%-反应物。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培育3天后完成流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培育。(a,b) CFSE可抑制(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

假设：我们断定的假设是，来自平稳困难重重子的转化无意识CD4+Treg在GITR强调之中得到了扩展到和丰富，强调了大幅度研究工作Treg在1型号心血管疾病风险个基底之中的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28